2017-08-07
La proteomica è di comprendere ulteriormente il meccanismo delle attività vitali e il meccanismo molecolare di presenza di malattie dal livello del proteome, e nella ricerca della proteomica, l'estrazione delle proteine è uno degli aspetti più fondamentali e più critici. Tris è un agente comune nell'esperimento di estrazione proteica vegetale, i metodi includono tris-hcl, tris-fenolo, tris-acetone-fenolo. Questi metodi saranno riassunti in questo articolo.
Tris-HCl
L'effetto di tris-hcl sull'estrazione della proteina era migliore di quello di tca-acetone. L'estrazione di proteina tca-acetone è irregolare nella piccola regione molecolare, le macchie proteiche non sono chiare, le strisce orizzontali e le strisce verticali sono relativamente gravi, mentre il tris-hcl supera i suddetti difetti e separa la proteina acida che è difficilmente separabile da tca -acetone metodo. Oltre alla separazione di proteine di peso molecolare più moderato, tris-hcl potrebbe anche ottenere un sacco di peso molecolare e proteina a basso peso molecolare.
Il metodo tris-hcl ha i vantaggi di un breve tempo di estrazione, di un costo moderato, di una semplice fase di estrazione, di una minore perdita di proteine e di un risultato sperimentale riproducibile.
tris-fenolo
Tris-fenolo utilizza le caratteristiche di fenolo trisoturato: il fenolo è un buon solvente per le proteine, le proteine e i lipidi vengono sciolti in fenolico nella preparazione del campione, mentre il sale, l'acido nucleico, i polifenoli ei polisaccaridi e altre sostanze solubili sono in La fase dell'acqua; Aumentando la forza centrifuga e il tempo di centrifugazione, è possibile lasciare il più possibile il densità dello zucchero allo strato superiore del surnatante; Le proteine nella fase fenolica potrebbero precipitare attraverso la soluzione di metanolo di acetato di ammonio e quindi la pulizia della proteina con acetone freddo più volte, i pigmenti e gli ioni di ammonio e altre impurità possono essere rimossi.
Questo metodo è molto efficace nel trattamento di campioni di piante contenenti una grande quantità di sostanze interferenti, ma è relativamente complesso e richiede tempo.
tris-acetone-fenolo
La combinazione di tca-acetone e tris-fenolo per l'estrazione della proteina ha i vantaggi della precipitazione tca-acetone e del trisfenolo. La tca residua viene prima lavata con una soluzione di metanolo contenente acetato di ammonio e regolata la pH della soluzione fino a 7,0 e una miscela di fenolo e sds viene utilizzata per sciogliere la proteina. L'estrazione combinata di fenoli-sds è più efficace del fenolo, solo l'estrazione del buffer sds. Il metodo tris-acetone-fenolo ha ottenuto ottimi risultati nell'estrazione proteica di molte piante e lo sfondo e la striscia in pattern elettroforetico sono molto chiari, possono essere ampiamente utilizzati nelle foglie di piante e nell'estrazione di proteine di frutta.
Il metodo di estrazione è molto risparmio di tempo, il tempo totale di estrazione è di circa 1 ora, notevolmente inferiore a quello del metodo tradizionale.
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