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biosensore enzimatico elettrochimico relativo al DNA con tampone di mop 2019-05-17 11:22:18

la trasmissione stabile del materiale genetico è il fondamento della riproduzione della vita. la precisa replica e distribuzione del DNA è la base del trasferimento del materiale genetico, ed è anche il doppio evento biologico del ciclo cellulare. Gli enzimi correlati al DNA sono uno dei fattori più importanti nel processo di replicazione. sono coinvolti non solo nel processo di sintesi del DNA genomico normale, ma anche in vari processi di riparazione sotto il danno del DNA. una varietà di mutazioni del gene degli enzimi correlate al DNA sono associate a determinati tumori e malattie genetiche. i biosensori elettrochimici di enzimi correlati al DNA rendono più semplice il rilevamento. L'acido 3- (n-morfolino) propanosulfonico (mop) è un tampone biologico comunemente usato.


recentemente, i ricercatori [1] hanno fornito un biosensore enzimatico elettrochimico basato sul dna basato su nanocluster di DNA-rame con una buona specificità, alta sensibilità, velocità di rilevazione rapida, risultati accurati e affidabili e basso costo. i passaggi specifici sono i seguenti:


(1) elettrodo 1: miscelare sulfidrilico dna (2,5 ~ 7,5 μl, 0,25 ~ 0,75 μm) e tris (2-carbossietil) fosfina (tettura) (0,5 ~ 1,5 μl, 0,5 ~ 1,5 mm), uniformemente a 27 ~ 42 ° c per 30 ~ 90 minuti, lasciare cadere sulla superficie di un elettrodo pulito color oro (au) e lavare l'elettrodo con acqua diluita.
(2) elettrodo 2: prendere 1 ~ 3 μl di tampone di mop (mocio da 10 mm, 150 mm nacl, ph 7.6), da 0,5 a 1,5 μl di tampone 5 × tdt e dttp (0,5 ~ 1,5 μl, preparare la soluzione di reazione tdt con 5 ~ 15mm) e tdt (0.1 ~ 1.5μl, 5 ~ 15u / ml), controllare il volume totale a 2.5 ~ 7.5μl, mescolare bene, lasciare cadere sulla superficie dell'elettrodo 1 e posizionarlo a 27 ~ 42 ° c 0.5 ~ 1.5 h, lavare l'elettrodo con acqua diluita.

(3) elettrodo 3: cu2 + (2,5 ~ 7,5 μl, 0,5 ~ 1,5 mm) è stato aggiunto a gocce sulla superficie dell'elettrodo dell'elettrodo 2, e incubato a temperatura ambiente per 10 ~ 30 minuti e l'elettrodo è stato lentamente tamponato da acqua distillata. quindi, la soluzione di ascorbato di sodio (2,5 ~ 7,5 μl, 1 ~ 3 mm) è stata aggiunta goccia a goccia sulla superficie dell'elettrodo e fatta reagire a temperatura ambiente per 10 ~ 30 minuti e l'elettrodo è stato lentamente lavato con acqua distillata.


rispetto al processo precedente, il sensore presenta i seguenti vantaggi:
(1) alta sensibilità. la risposta corrente del sensore al limite di rilevamento tdt è 0.0008u / ml, il limite di rilevabilità della concentrazione di exo i è 0,002u / ml, a indicare che il sensore raggiunge un rilevamento altamente sensibile di tdt ed exo i.
(2) alta specificità. altri enzimi comuni come ureasi (ureasi), acetilcolinesterasi (dolore), uracil-dna glicosilasi (udg), istone acetilasi (cappello), protein chinasi (pka), fosfatasi alcalina (alfa), non hanno interferenze con il tdt e l'eso i sistemi di rilevamento di attività.
(3) rilevamento di inibitori. attraverso la risposta elettrochimica del biosensore elettrochimico all'attività enzimatica, può essere ottenuta la rilevazione dell'inibitore di tdt sodio pirofosfato (pp) e del polietilenglicole (peg) dell'inibitore di eso i e la correlazione della risposta elettrochimica del sensore con gli inibitori dell'enzima può essere ottenuto..
(4) i reagenti sono in una piccola quantità, la velocità di rilevamento è veloce e il costo è basso.

in sintesi, il biosensore enzimatico elettrochimico del dna ha i vantaggi di alta sensibilità, buona selettività, funzionamento semplice, analisi rapida e funzionamento facile, e può realizzare il rilevamento di bassa concentrazione tdt ed exo i, e ha una buona prospettiva applicativa.


riferimento

[1] Biosensore enzimatico elettrochimico relativo al DNA basato su nanocluster DNA-rame e sua applicazione. cn109613096a, 2019-01-21.


modificato da suzhou yacoo science co., ltd .
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