cappucci, marcatore molecolare o tampone biochimico?
2019-01-18 11:07:29
in esperimenti biochimici, l'abbreviazione "caps" è frequente, e ha due significati completamente diversi.
1. sequenze polimorfiche amplificate marcate con marcatori molecolari
capsbufferSequenze polimorfiche amplificate, note anche come rflp-pcr, che vengono utilizzate principalmente per l'analisi di restrizione di frammenti di DNA amplificati con pcr. si tratta di una tecnica per la progettazione di primer specifici basati su sequenze di geni est o pubblicati e sulla combinazione di specifici pcr con la digestione degli enzimi di restrizione per rilevare il polimorfismo.
con lo sviluppo della tecnologia della biologia molecolare, anche la tecnologia dei marcatori molecolari del DNA si è sviluppata rapidamente. ci sono dozzine di marcatori molecolari, come rflp, aflp, sts, caps, cicatrice, ssr, snp, rapd, issr, trap, ecc., sono ampiamente usati nell'allevamento genetico, nella mappatura del genoma, nella mappatura genica, nell'identificazione filogenetica delle specie, costruzione di banche di geni, clonaggio di geni e così via. diversi marcatori molecolari hanno diversi vantaggi e svantaggi e anche le loro principali applicazioni sono diverse. caps ha i vantaggi della co-dominanza, specificità del sito, funzionamento semplice e basso costo ed è stato ampiamente utilizzato nella genotipizzazione delle piante, localizzazione, clonazione, identificazione molecolare e diversità genetica degli animali, identificazione delle varietà, mappe di linkage e identificazione di microrganismi. ha le seguenti caratteristiche:
(1) ci sono molte combinazioni di primer e enzimi di restrizione, che aumenta la possibilità di rivelare polimorfismi ed è facile da usare e può essere analizzato mediante elettroforesi su gel di agarosio;
(2) negli eucarioti, il marcatore caps è codominante, che può distinguere tra genotipi omozigoti e genotipi eterozigoti;
(3) la quantità di DNA richiesta è piccola e la concentrazione di DNA non è critica;
(4) i primer utilizzati sono più lunghi, i risultati di amplificazione sono più stabili e la fase di trasferimento della membrana nell'analisi rflp è evitata, e la precisione dell'analisi rflp può essere mantenuta;
(5) l'operazione è semplice, veloce e altamente automatizzata.
sebbene il marcatore dei tappi abbia molti vantaggi, poiché deve usare un enzima di restrizione, lo screening di una combinazione enzimatica adatta è laborioso e il numero di siti di clivaggio mutante è stato trovato limitato, il che limita il suo sviluppo su larga scala e applicazione.
2. buffer biochimicoacido n-cicloesil-3-amminopropansolfonico
la formula molecolare di caps è c9h19no3s, il valore di pka è 10.4 a 25 ° c, il range di buffer è 9.7 ~ 11.1. anche se i tappi non sono introdotti da good et al., a volte viene anche chiamato buffer di good. le sue aree di applicazione sono le seguenti:
(1) utilizzato come tampone di trasferimento per la diffusione e l'elettroblotting;
(2) tampone legante ed eluente in cromatografia a scambio cationico;
(3) tampone di corsa in elettroforesi capillare;
(4) soluzione di cristallizzazione efficace per varie proteine;
(5) tampone di saggio enzimatico
(6) sostenere l'attività della fosfatasi alcalina e inibire la crescita di aeromonas spp. a ph 10.5;
(7) adatto per l'uso con il dosaggio dell'acido bicinconinico (bca).
la ricetta di caps buffer, 50x:
sciogliere 111 g di tappi (3- [acido cicloesilammino] -1-propanosolfonico) in h2o, e regolare ph a 10.5 con naoh. alzare il volume finale a 1 litro con h2o. la concentrazione finale sarà di 500 mm.
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