le proteine sono responsabili di reazioni biochimiche complesse e hanno una struttura tridimensionale specifica nell'esercizio delle funzioni biologiche. nei test biochimici, i ricercatori spesso devono studiare la denaturazione e la rinaturazione delle proteine,guanidina cloridratoe l'urea sono i reagenti più comunemente usati, qual è la differenza tra questi due reagenti? qual è il migliore?
ci sono due meccanismi per la denaturazione delle proteine da parte di guanidina cloridrato e urea:
(1) la proteina denaturata si combina preferenzialmente con la guanidina cloridrato e l'urea per formare complessi. con l'aumentare della concentrazione di denaturante, la proteina in stato naturale si trasforma in complessa, con conseguente completa denaturazione;
(2) la solubilizzazione di guanidina cloridrato e urea per residui di aminoacidi idrofobici: guanidina cloridrato e urea sono in grado di formare legami idrogeno, che possono rompere la soluzione acquosa ad alta concentrazione (4 ~ 8mol / l) per diventare un solvente migliore per non - residui polari, in modo che la solubilità delle molecole proteiche all'interno dei residui idrofobici aumenti e si verifichi la degenerazione.
quali sono le differenze tra la guanidina cloridrato e l'urea?
- concentrazione: a temperatura ambiente, 3 ~ 4mol / l guanidina cloridrato può rendere la proteina globulare al punto medio dallo stato naturale allo stato di denaturazione; circa 6mol / l di guanidina cloridrato può rendere la proteina completamente in stato di degenerazione. mentre alcune proteine globulari non possono essere completamente denaturate anche in soluzione di urea da 8 ml / l.
- solubilità: l'urea si dissolve lentamente e debolmente della guanidina cloridrato. la sua solubilità è del 70% ~ 90%. la solubilità della guanidina cloridrato è superiore al 95%.
in generale, come reagenti comunemente usati nella denaturazione delle proteine, guanidina cloridrato (50-01-1) ha una capacità di dissoluzione relativamente forte e una capacità denaturata e non causa la modifica covalente della proteina ricombinante, ma ha gli svantaggi di una precipitazione facile e facile in condizioni acide e l'interferenza con la cromatografia a scambio ionico di proteine; la solubilità dell'urea è relativamente debole, tuttavia presenta i vantaggi della non ionizzazione, della neutralità, del basso costo e della mancanza di precipitazione della proteina dopo la rinaturazione delle proteine.
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