gli acidi nucleici includono acido desossiribonucleico (DNA) e acido ribonucleico (rna) e sono una classe di macromolecole biologiche con informazioni genetiche. lo studio ha scoperto che il DNA libero contiene anche informazioni genetiche molto importanti. pertanto, negli ultimi anni, la ricerca sul DNA libera è diventata un campo caldo nella ricerca di diagnostica molecolare genomica, ed è stata gradualmente applicata a tutte le fasi dalla diagnosi iniziale del tumore al trattamento e allo sviluppo. tuttavia, la tecnica di estrazione del DNA libero necessita ancora di ulteriori miglioramenti.

i ricercatori hanno sviluppato un kit di estrazione e arricchimento del DNA libero e un metodo per estrarre il DNA libero, con l'obiettivo di risolvere il problema tecnico che il solvente organico ha una certa tossicità nel metodo di estrazione di acido nucleico libero esistente.

kit gratuito di estrazione e arricchimento del DNA

il kit include lisato campione, soluzione legante, lavaggio primario, lavaggio secondario, eluente e microsfere nanomagnetiche:

• i componenti del lisato del campione comprendono acqua priva di nucleasi, reagente a e reagente b. il reagente a è almeno uno di isotiocianato di guanidinio, guanidina cloridrato , sodio ioduro e perclorato di sodio. il reagente b è almeno uno tra tween20, tritone-x100, sds, np40 e un tensioattivo non ionico di tipo poliossietilene;
• oltre ai componenti del lisato campione, la soluzione legante include anche il reagente c, che è almeno uno tra isopropanolo ed etanolo assoluto;
• la composizione della soluzione di lavaggio primaria è uguale alla soluzione combinata;
• il secondo liquido di lavaggio è uno di acqua priva di nucleasi, una concentrazione molare di 0,1 ~ 1 m di soluzione di cloruro di sodio, tampone tris o tampone;
• l'eluente è costituito da acqua priva di nucleasi, tampone tris o tampone;
• il nucleo magnetico delle perline nanomagnetiche è fe-co-niox. la distribuzione delle dimensioni delle particelle è compresa tra 300-400 nm. lo strato superficiale del nucleo magnetico è rivestito con almeno strato di carbonio e strato di silice inorganica dall'interno all'esterno. e il polietilenglicole viene innestato in modo covalente sullo strato più esterno.

metodo di estrazione del DNA libero

• aggiungere prima la proteasi k, quindi aggiungere il campione e la sequenza di lisato, aggiungere i componenti nella provetta da centrifuga, agitare e incubare per eseguire la lisi del campione;
• le microsfere magnetiche nano e la soluzione legante sono proporzionate per formare una soluzione legante nano magnetica;
• aggiungere la soluzione legante nano magnetica preparata al campione, agitare e mescolare e scartare il surnatante;
• lavare il DNA libero con una soluzione di lavaggio;
• lavare il DNA libero con una soluzione di lavaggio secondaria;
• aggiungere l'eluente e scuotere per risospendere le nanobeads e scuotere ulteriormente per eluire il DNA libero sulle nanobeads.

il metodo non utilizza reagenti tossici come benzene e cloroformio nel metodo tradizionale per ridurre al minimo il danno agli operatori sperimentali, rispettare pienamente il moderno concetto di protezione ambientale e meglio soddisfare le condizioni cliniche di utilizzo; lisi, denaturazione e promozione dell'arricchimento dell'acido nucleico, la maggior parte dei campioni non richiede l'uso aggiuntivo di proteinasi k e lisato campione; richiede meno tempo ed è facile da usare per tutti i processi di rilegatura, lavaggio ed eluizione a temperatura ambiente.

riferimento

kit gratuito di estrazione e arricchimento del DNA e metodo di estrazione del DNA libero. cn109913447a, 2019-06-21.

modificato da suzhou yacoo science co., ltd.