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mops utilizzati nel rilevamento di proteine ​​negli alimenti e nei foraggi 2019-08-09 15:05:36


le proteine ​​negli alimenti o nei mangimi cambiano spesso struttura e solubilità a causa del trattamento termico o della reazione chimica durante il processo di lavorazione, con conseguente scarsa solubilità.


I metodi di rilevamento delle proteine ​​divulgati negli standard nazionali comprendono principalmente tre tipi: metodo kjeldahl, spettrofotometria e metodo di combustione. Anche il metodo biureto, il metodo bca, il metodo blu coomassie, il metodo lowry e il metodo ultravioletto sono spesso usati in laboratorio biochimico. i dettagli sono i seguenti:


tabella 1. metodi di rilevamento delle proteine

nome

metodo

caratteristiche

metodo kjeldahl

(1) decompone la proteina; (2) determina la quantità di ammoniaca per titolazione o sviluppo del colore (3) converte nella quantità totale di proteine

è ampiamente utilizzato, ma il test richiede molto tempo (di solito 2-4 ore)

spettrofotometria

il tempo di rilevamento complessivo è relativamente breve, ma è ancora necessario un passaggio di digestione (circa 1 ora o più)

metodo di combustione

facendo bruciare il campione ad alta temperatura per generare azoto gassoso per determinare la quantità totale di proteine

il costo del consumo giornaliero è elevato e il flusso di rilevamento del campione è basso. il rilevamento di campioni di proteine ​​su larga scala non è applicabile

laboratorio biochimico ( metodo del biureto, metodo del bca, metodo del blu di coomassie, metodo di lowry e metodo dei raggi ultravioletti )

rilevazione di proteine ​​in campioni di proteine ​​di elevata purezza mediante colorimetria o colorimetria diretta dopo sviluppo di colore chimico

il tempo di rilevamento è significativamente ridotto, ma richiede che le proteine ​​nel campione siano completamente dissolte e che il sistema cromogenico sia chiarito e privo di interferenze sul percorso ottico.

pertanto, è urgentemente necessario sviluppare un test in grado di garantire l'accuratezza dei risultati della misurazione, nonché un breve tempo di misurazione e un'ampia gamma di obiettivi di misurazione applicabili (in particolare, possono essere utilizzati direttamente per misurare il contenuto proteico nei campioni contenente proteine ​​scarsamente solubili).

i ricercatori [1] hanno sviluppato un nuovo metodo che comprende le seguenti fasi:

(1) reagente a: dissoluzione alchil solfato di sodio lineare e idrossido di sodio in acqua ad una concentrazione molare di 45 ~ 100 mm e 150 ~ 300 mm, rispettivamente; reagente b: solfato di rame o solfato di rame idrato, tartrato di sodio e idrossido di sodio solubili in acqua in concentrazioni molari di 5 ~ 10 mm, 15 ~ 30 mm e 150 ~ 750 mm;


(2) preparazione dei campioni: utilizzo di acqua priva di proteine ​​o tampone come campione bianco; scioglimento dell'albumina sierica bovina in acqua o Acido 3-morfolinpropanesulfonico (mops) tampone e regolazione della concentrazione della proteina, ottenendo così una serie di soluzioni aventi una concentrazione proteica compresa tra 0,2 mg / ml e 30 mg / ml come campione proteico standard; disperdere il materiale contenente proteine ​​da testare in acqua o tampone e, facoltativamente, mediante processo di diluizione per preparare un campione da testare;


(3) miscelazione del reagente a con un campione bianco, un campione proteico standard e un campione da testare, rispettivamente, per ottenere una miscela corrispondente di reagente, in cui il contenuto proteico nel reagente una miscela del campione da testare soddisfa le requisito di intervallo lineare. e ciascun reagente una miscela viene riscaldata a bagnomaria ad una temperatura di 90 ~ 100 ° C, quindi raffreddata a temperatura ambiente;


(4) miscelare ogni reagente una miscela con il reagente b per ottenere una corrispondente miscela di reagente b, e riscaldare ciascuna miscela di reagente b in un bagno d'acqua a una temperatura di 50 ~ 70 ° C e raffreddare a temperatura ambiente;


(5) filtrando ciascuna delle miscele di reagente b, usando come riferimento la miscela di reagente b del campione bianco raffreddato e misurando la miscela di reagente b del campione di proteine ​​standard raffreddato e il reagente b del campione da testare a 540 nm usando uno spettrofotometro.


(6) in base al contenuto proteico del campione quasi proteico, la relazione tra il contenuto proteico e l'assorbanza è ottenuta mediante adattamento lineare e viene calcolato il contenuto proteico nel campione da testare.


il metodo di rilevamento delle proteine ​​richiede un tempo di rilevamento più breve, aumenta la solubilità delle proteine ​​insolubili, ha una vasta gamma di applicazioni, risultati di misurazione accurati, ampio intervallo lineare, alta sensibilità, alta precisione e buona riproducibilità. inoltre, il metodo di prova è compatibile con accessori e apparecchiature di misurazione ad alto rendimento e può rilevare rapidamente grandi quantità di campioni, rendendolo più adatto a processi industriali su larga scala.


riferimento

metodo di rilevamento delle proteine ​​e kit di rilevamento delle proteine. cn105987884b, 03-03-2015.

modificato da suzhou yacoo science co., ltd.

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