(1) la preparazione diHEPES

il sinteticoitinerario

• sintesi del composto 1

la piperazina esaidrato è stata usata come materia prima, sciolta in etanolo per formare una soluzione trasparente di colore, quindi è stato aggiunto ossido di etilene mentre il riflusso a 80 ° c. una volta completata la reazione, l'etanolo è stato distillato a pressione ridotta e il residuo è stato separatotato e purificato per frazionamento sotto vuoto, è stato raccolto un distillato di 125 ~ 127 ° c (composto 1).

• sintesi del composto 2

prima, solfito di sodio anidro e acqua sono stati aggiunti al pallone, la miscela è stata riscaldata a bagnomaria. quando la temperatura ha raggiunto 90 ° c, 1,2-dicloroethane fu aggiunto a gocce, e il reflusso fu continuato. il liquido di reazione è stato concentrato a pressione ridotta in un bagno d'acqua di 70 ° c in un solido bianco, il solido è stato sospeso in etanolo al 95% e la miscela è stata riscaldata a riflusso e filtrata per rimuovere insolubili. il supernatante è stato lasciato riposare a 0 ° C durante la notte. cristalli a fiocchi bianchi sono stati raccolti mediante filtrazione di aspirazione utilizzando un imbuto buchner.

• SYNTHESIs di hepes (cas 7365-45-9)

il composto 1, 2 e acqua sono stati posti in un pallone, agitati in una soluzione trasparente incolore (ph & gt; 13) e incubati esternamente a 110 ° c ~ 115 ° c in un bagno d'olio. agitarlo per 20 minuti e il pH della soluzione di reazione diminuì gradualmente fino a 9 e fu aggiunto goccia a goccia 5n di idrossido di sodio amantenereil ph della soluzione di reazione tra 9 e 10. quando il ph della soluzione di reazione non diminuisce, l'idrossido di sodio viene arrestato e il reflusso viene continuato fino a quando la reazione è completata.

la soluzione di reazione raffreddata è stata quindi diluita con acqua e purificata mediante colonna di resina a scambio ionico [h +] *. la soluzione raccolta ottenuta mediante cromatografia was concentrato a pressione ridotta, quindi filtrato ed evaporato. la soluzione trasparente trasparente incolore è stata ulteriormente concentrata su uno sciroppo denso, versata in ebollizione al 95%, regolata a pH 5 con acido acetico glaciale e immediatamente aggiunta assoluta di etanolo per precipitare i cristalli bianchi, naturalmente raffreddati a temperatura ambiente e posizionati a 0 ° c per la notte.

i cristalli sono stati raccolti mediante filtrazione di aspirazione utilizzando un imbuto buchner e lavati con etanolo ghiacciato. i cristalli lavati furono sospesi in etanolo al 95%, riscaldati a 75 ° c, e fu aggiunta acqua a gocce per dissolversi completamente. dopo filtrazione a caldo, il supernatante viene aggiunto con etanolo assoluto e raffreddato naturalmente sotto agitazione per far precipitare i cristalli bianchi in una forma libera. lasciare a zero gradiHT.

i cristalli sono stati raccolti mediante filtrazione di aspirazioneutilizzando un imbuto buchner, lavato con etanolo anidro ghiacciato e asciugato a 80 ° c per dare il prodotto.

(2) preparazione del buffer dell'herpes

a seconda dell'application, hepes + naoh e hepes + salt sono comunemente usati:

• hepes + naoh (500 ml): 119.15 g di hepes viene sciolto in 400 ml di acqua distillata, aggiungere 0,5 ~ 1 m di soluzione acquosa naoh per regolare il pH e quindi renderlo 500 ml con acqua distillata.
• hepes + sale (500ml): hepes 6,5 g, nacl 8,0 g, na2hpo4 • 7h2o 0,198 g, regolato il pH con 0,5 m di soluzione acquosa naoh e renderlo 500 ml.

Acin base al rapporto di lepe-zuniga et al., l'hepes ha una fototossicità quando esposto alla luce ambientale mediante la produzione di perossido di idrogeno. è quindi vivamente consigliato di mantenere le soluzioni contenenti hepe al buio il più possibile.