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ricette di buffer hepes 2019-03-13 16:35:33

Acido 4- (2-idrossietil) -1-piperazineetansolfonico(hepes) è un tampone di ioni idrogeno che ha una buona capacità tampone nel range di ph di 6.8 ~ 8.2 e può controllare un ph costante per un lungo periodo di tempo. può essere utilizzato in una vasta gamma di reazioni biochimiche, come, nella ricerca di organelli e proteine ​​ed enzimi ph-sensibili altamente denaturati, così come kit diagnostico biochimico, kit di estrazione del DNA / rna e kit diagnostico pcr. di seguito elencheremo le ricette usate più comuni.


(1)buffer dell'herpes

reagente

importo da aggiungere (per 1 l)

concentrazione finale

n / ACl

6,72 g

115 mm

CaCl2

133 mg

1,2 mm

MgCl2

114 mg

1,2 mm

K2hPo4

418 mg

2,4 mm

HEPES

4,77 g

20 mm

H2O

a 1 l


regola il ph a 7.4 con hcl o naoh. il buffer dell'herpes può essere conservato in frigorifero per diverse settimane.
(2) buffer di legame dell'herpes
Hepes da 10 mm, ph 7.4; 150 mm nacl; 5 mm kcl; 1 mm mgcl2; 1,8 mm cacl2.
  • annessina v-fitc nel buffer di legame dell'herpes
L'annessina v-fitc può essere ottenuta da diverse società (ad es., clontech, boehringer mannheim, biowhittaker). raccomandiamo la titolazione per determinare le concentrazioni ottimali.
  • pi nel buffer di legame dell'herpes
100 μg / ml di ioduro di propidio, sciogliere lo ioduro di propidio nel tampone di legame dell'herpes.
(3) buffer hepes-krh

reagente

concentrazione finale

NaCl

116 mM

KCl

4 mM

MgCl2

1 mM

CaCl2

1,8 mM

glucosio

25 mM

acido hepes

10 mM


regola ph a 7.4.
(4) tampone salino tamponato da hepes

reagente

concentrazione finale

NaCl

150 mm

Tween-20

0.005% (v / v)

edta

3 mm

hepes ph (7.4)

10 mM


(5) tampone di precipitazione salina (hbs) tampone hepes (2 ×)
Hepes 50 mm, 280 mm nacl. regola il ph a 7.10 (± 0.05) con naoh. porta il volume finale a 1 l in ddh2o. filtrare sterilizzare.
(6) tampone di immunoprecipitazione dell'herpes

reagente

concentrazione finale

NaCl

10 mm

na-β-glicerofosfato

20 mM

edta

1mm

hepes ph (7.5)

50 mM

Na3vo4

0,1 mm

NAF

50 mm

PMSF

1mm

digitale terrestre

1mm

np-40

0,1%

cocktail inibitore della proteasi


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