tris (idrossimetil) amminometano(tris) soluzione tampone è un reagente biologico, che è una soluzione tampone comunemente usata nella preparazione biologica e nella preparazione medica. è comunemente usato in: tampone per elettroforesi su gel, come tae o tbe; preparazione di tampone laemmli; preparare il buffer di funzionamento e il buffer di caricamento insieme a glicina e sds; tampone legante ed eluente nella cromatografia a scambio anionico; ibridazione del rna e scissione del DNA. qui di seguito vi presenteremo le ricchezze dei buffer per gli esperimenti di rna con tris.
(10 ×)
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reagente |
quantità (per 1,0 ml) |
concentrazione finale(10 ×) |
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tris-hCl (1 m, ph 8.0) |
500 μl |
0.5 M |
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MgCl2 (1 m) |
150 μl |
0.15 M |
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ditiotreitolo (dtt) (0.5 m) |
66 microlitri |
33 mm |
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h2o |
284 μl |
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(2 ×)
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reagente |
quantità (per 1.0ml) |
concentrazione finale (2 ×) |
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atp (100 mm) |
10 microlitri |
1 mm |
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tris-hcl (1 m, ph 8.0) |
200 μl |
200 mm |
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MgCl2 (1 m) |
20 μl |
20 mm |
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dtt (1 m) |
6,6 microlitri |
6,6 mm |
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DMSo |
200 μl |
20% (v / v) |
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glicerolo (ultrapuro) |
300 μl |
30% (v / v) |
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h2o |
a 1 ml |
- |
tris-hcl (10 mm, ph 7.6)
edta (1 mm)
sodio dodecil solfato (sds) (0,5%, peso / volume)
3. RNA vincolante
1 × tampone tris-tamponato (tbs)
0,05% di interpolazione 20
2 mm mgcl2 (senza rnasi)
Tris da 10 mm (ph 7.5, senza rnase)
137 mm nacl (senza rnase)
3 mm kcl (senza rnase)
2 mm mgcl2 (senza rnasi)
2% di albumina di siero bovino (bsa)
10 μg / ml ssdna
10 μg / ml di lievito di trnacombinare tutti gli ingredienti tranne ssdna e lievito trna.
4. tampone di lisi per il lievito rna
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reagente |
quantità (per 100 ml) |
concentrazione finale |
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tris-hcl (1 m, ph 6.8) |
5 ml |
50 mm |
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nacl (1 m) |
10 ml |
100 mm |
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edta (0.5 m, ph 8.0) |
2 ml |
10 mm |
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DDh2o |
a 100 ml |
- |
5. buffer di annealing rna (10x)
0,5 m nacl
Ditiotreitolo da 100 mm
100 mm mgcl2
Tris-hcl da 100 mm (ph 7.5)
6. buffer di trascrizione di rna
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reagente |
importo da aggiungere |
concentrazione finale |
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MgCl2 (1 m) |
300 μl |
30 mm |
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nacl (5 m) |
100 μl |
50 mm |
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spermidina (1 m) |
100 μl |
10 mm |
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Tris-hcl (1 m) (ph 7.9) |
2 ml |
200 mm |
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H2o, priva di nucleasi |
7,6 ml |
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7. buffer di trascrizione per rna polimerasi (5 ×)
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reagente |
quantità (per 10 ml) |
concentrazione finale |
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tris-hcl (1 m, ph 8.0) |
2 ml |
200 mm |
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MgCl2 (1 m) |
400 μl |
40 mm |
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nacl (5 m) |
0,5 ml |
250 mm |
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spermidina (100 mm) |
1 ml |
10 mm |
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H2O |
6,1 ml |
- |
nell'uso di tris, va notato che il ph del buffer tris è fortemente influenzato dalla temperatura e dalla concentrazione, quindi l'ambiente deve essere considerato durante il processo di preparazione.
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