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Il principio e precauzioni di tiazolo blu (MTT) colorimetria 2020-10-28 14:39:59

1 Cosa è Thiazole blu ( MTT )

Tiazolo Blu, numero cas 298-93-1, formula molecolare c 18 h 16 BrN 5S, è un giallo o arancio-giallo polvere, punto di fusione: 195 ° C (decomposizione). leggermente solubile in metanolo, ma difficilmente solubile in acqua o etanolo. non può essere completamente sciolto con etere, acetone o etile acetato. disciolto in DMSO. è spesso formulato come 5mg / ml stock soluzione.

 

2 principio di rilevamento di tiazolo blu (MTT) metodo colorimetrico

Tiazolo blu (MTT) la colorimetria è un metodo per rilevare la sopravvivenza e la crescita delle cellule Il principio del MTT esperimento è che il succinate deidrogenasi nei mitocondri delle cellule viventi può ridurre il MTT esogeno a cristallo blu-viola insolubile in acqua formazan (Formazan) e lo depositano nelle cellule, mentre le cellule morte non hanno tale funzione. Dimetile solfossido (DMSO) può dissolvere formazan nelle celle e il suo valore di assorbimento della luce è misurato a 490nm lunghezza d'onda con un enzima legato test immunologico, quale può riflettere indirettamente il numero di cellule viventi Il quantità di MTT la formazione di cristalli in un certo intervallo di numeri di celle è proporzionale al numero di celle in base al valore di assorbanza misurato (valore OD ), il numero di cellule viventi viene giudicato. Il maggiore è il valore od, maggiore è l'attività cellulare (se viene misurata la tossicità del farmaco, minore è la tossicità del farmaco ). Questo metodo è stato ampiamente utilizzato nella rilevazione dell'attività di alcuni fattori biologicamente attivi, su larga scala anti-tumorale screening farmacologico, test di citotossicità e determinazione della radiosensibilità tumorale è caratterizzato da alta sensibilità e economia.

3applicazione di Tiazolo blu (MTT)

MTT viene solitamente utilizzato per la proliferazione cellulare, la determinazione della vitalità cellulare e il farmaco (compresi altri trattamenti come radiazioni esposizione) per determinare la tossicità delle cellule coltivate in vitro.

4. Il vantaggi e svantaggi di tiazolo blu (MTT) colorimetria

(1) Vantaggi: è semplice, veloce, economico e non utilizza isotopi.

(2) Svantaggi: Il formazan prodotto ottenuto dalla riduzione di MTT è insolubile in acqua e deve essere sciolto prima del rilevamento. l'aumento del carico di lavoro influenzerà anche l'accuratezza dei risultati sperimentali e il solvente organico che dissolve formazan è anche dannoso per la salute degli sperimentatori.

5.Precauzioni per tiazolo blu (MTT)

(1) nel processo di preparazione e conservazione, il contenitore è avvolto al meglio con alluminio foglio.

(2) Il preparato MTT deve essere sterile e MTT è molto sensibile ai batteri.

(3) MTT è generalmente meglio essere preparati immediatamente. è efficace entro due settimane dalla filtrazione a 4 ° ce protetto da leggero, oppure è formulato come 5mg / ml e memorizzato a -20 ° c per la conservazione a lungo termine. evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti è meglio confezionare in piccole dosi. avvolgerlo in un a prova di luce sacchetto o carta nera o stagnola per evitare la decomposizione leggera. Quando MTT diventa grigioverde, non potrà mai essere utilizzato di nuovo.

(4) MTT è cancerogeno, usalo con attenzione e se possibile, è meglio indossare una pellicola trasparente guanti. In genere, il MTT concentrazione in questo metodo è 5 mg / ml. Pertanto, tu può pesare MTT 0,5 g, scioglierlo in 100ml di tampone fosfato (PBS) o fenolo rosso esente medio, filtralo con a 0,22 μ m microporoso membrana per rimuovere i batteri nella soluzione, conservarla a 4ed evitare la luce can. nel processo di preparazione e conservazione, il contenitore è avvolto al meglio con alluminio foglio.

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