in tutti i tipi di esperimenti di cellule, proteine ​​e DNA, una volta che i componenti lasciano l'ambiente biologico naturale, saranno seriamente colpiti. per fornire loro un buon ambiente naturale, deve essere usato tampone, tris, fosfato, hepes ( Acido 4-idrossietilpiperazinoetanosolfonico ), ecc ...... allora come scegliere un buffer più adatto?

diamo un'occhiata ai buffer biologici comunemente usati e alle loro caratteristiche:

1. Tampone fosfato

il tampone fosfato è il buffer più utilizzato. a causa della sua dissociazione secondaria, il buffer ha un ampio intervallo di ph e può essere configurato con tamponi acidi, basici e neutri di vari valori di ph:

• preparazione di tampone acido può direttamente utilizzare nah ₂ Po ₄ o kh ₂ Po ₄ , l'intervallo di ph è 1 ~ 5;
• il tampone alcalino può usare direttamente na ₂ HPO ₄ o k ₂ HPO ₄ , l'intervallo di ph è 9 ~ 12;
• il tampone neutro contiene concentrazioni uguali di nah ₂ Po ₄ e na ₂ HPO ₄ o uguali concentrazioni di kh ₂ Po ₄ e k ₂ HPO ₄ soluzioni a ph 5.5 ~ 8.5.

2. buffer tris

il tampone tris è ampiamente utilizzato nella ricerca biochimica. è una base debole e viene solitamente utilizzata nella gamma "neutrale". buffer tris-hcl: ph = 7,5 ~ 8,5; buffer tris-fosfato: ph = da 5,0 a 9,0.

oltre a tris-hcl, tris ha una varietà di buffer di derivatizzazione:

• tbs = tris-hcl + nacl + kcl, comunemente usato per pulire i tessuti immunocolorati o le membrane western blotting nel western blotting;
• tbst = tris-hcl + nacl + tween20, un tampone a membrana comunemente usato nel western blotting;
• te = tris-hcl + edta, che è protettivo contro le basi del DNA ed è spesso usato per la stabilizzazione e la conservazione del DNA;
• tae = tris base + acido acetico + edta, che è un sistema tampone ampiamente utilizzato nell'elettroforesi del DNA a segmento corto;
• tbe = trisbase + acido borico + edta, adatto per l'elettroforesi del DNA a lungo termine e ha un migliore effetto di separazione su frammenti più piccoli.

3. tampone glicina

glicina tampone ha una vasta gamma ph e una vasta gamma di applicazioni. l'intervallo di ph è 2,0 ~ 11,0. il sistema più comune e il range ph sono mostrati nella seguente tabella:

4. buffer dell'herpes

l'hepes è un tampone anfotero non ionico con una buona capacità tampone nell'intervallo di pH 7,2 ~ 7,4. è comunemente usato in kit diagnostici biochimici, kit di estrazione DNA / DNA e kit diagnostici PCR.

tabella 1. vantaggi e svantaggi dei buffer comunemente usati

principi generali per la selezione dei buffer:

(1) la cosa più importante è determinare il valore ph richiesto dal sistema.

(2) selezionare il sistema tampone, la capacità tampone diminuirà significativamente quando il pka cambia più di un'unità ph;

(3) il sistema tampone non dovrebbe influenzare l'attività della proteina o la stabilità del DNA ed evitare interferenze da altri ioni;

(4) infine, dobbiamo considerare anche l'effetto della temperatura: la temperatura non solo influenza il buffer, ma influenza anche le cellule. la maggior parte delle cellule animali ha un pH compreso tra 7,0 e 7,5 a 37 ° C e quando la temperatura scende a 0 ° C, può raggiungere 8,0.

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