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preparazione della soluzione di sviluppo del colore bcip / nbt

2022-02-15 10:21:41

bcip / nbt è unodelle combinazioni di substrato per fosfatasi alcalina (ap) e viene utilizzato perrilevare l'antigene legato alla nitrocellulosa o ad altre membrane. sotto la catalisidi ap, bcip viene idrolizzato per produrre un forte prodotto reattivo con cui reagiscenbt per formare un prodotto insolubile dal blu scuro al bluastro-viola. il corrispondentekit può essere utilizzato per la reazione cromogenica enzimatica della fosfatasi alcalinasistema in esperimenti ihc e wb. sotto la catalisi di ap, un blu profondoil precipitato è generato nel punto in cui il coniugato di ap è legato alsezione di tessuto o la membrana della macchia, e la posizione e l'espressione della proteina bersaglio può essere determinata in base alla reazione del colore. il seguentedescrive brevemente il metodo di preparazione della soluzione colorante bcip / nbt:

preparazione di bcip, nbt solution e buffer

(1) 1l tristampone (tris da 0,1 m, cloruro di magnesio 0,5 mm, pH = 9,5)

12.1g di tris e 0,12 g di cloruro di magnesio esaidrato sono stati aggiunti a 800 ml diacqua distillata e deionizzata (dd h2o). quindi, il ph è stato regolato a 9.5 conacido cloridrico e infine dd h2o è stato aggiunto per ottenere 1 l di tampone tris.

(2) soluzione nbt

0.7ml di dmf e 0,3 ml di dd h2o sono stati miscelati per dare 1 ml di una soluzione contenente70% dmf e quindi 30 mg di nbt sono stati sciolti in esso.

(3) bcipsoluzione

Inserisci15 mg di bcip a 1 ml di dmf per ottenere una soluzione bcip.

preparazione della soluzione cromatica bcip / nbt

ilsoluzione nbt sopra preparata e la soluzione bcip sono state mescolate e aggiunte a 100ml tris buffer per ottenere una corrispondente soluzione di sviluppo del colore.


a cura di suzhou yacoo science co., ltd.

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