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preparazione del gel tricine-sds-page

2022-02-15 10:17:48

Tricineè un buffer zwitterionico per biochimica e biologia molecolare, con un phintervallo di buffer di 7.4-8.8. durante la pagina di sds per separare i piccoli peptidi, il tricine ècomunemente usato invece di glicina nel buffer di laemmli. gel tricine-sds-pageha prestazioni superiori per l'identificazione di proteine ​​con molecolarepeso inferiore a 10 kd. mentre la tradizionale sds-page è usata per separarliproteine, possono verificarsi alcuni problemi, come strisce vaghe, gel troppo morbidi. Quidescriviamo un metodo di preparazione per gel tricine-sds-page.


reagenti:

anodobuffer (+): 200 mm tris ph = 8.9

catodicobuffer (-): 100 mm tris / 100 mm tricine / 0,1% sds

gelbuffer: 3,0 m tris, ph = 8,45 / 0,3% sds

impilamentoacrilammide: 48% acrilamide / 1,5% bis-acrilammide

separazioneacrilamide: 46,5% acrilammide / 1,5% bis-acrilammide

campionetampone (20 ml):

5ml 0,5 m tris ph = 6,8; 4 ml 20% sds; 1 ml di 2-mercaptoetanolo; 4 ml 50% di glicerolo;0,004 g di blu di bromofenolo; 6 ml ddh 2 o.

gel separatore:

15%gel: 2 ml di acrilammide, 2 ml di tampone di gel, 2 ml di 50% di glicerolo.

10%gel: 1,22 ml di acido acrilico spillante, 2 ml di tampone di gel, 2 ml di glicerolo al 50% e 0,78ml ddh 2 o.

illa polimerizzazione è stata effettuata con 75 ul di 10% di persolfato di ammonio (aps) e7,5 ul di tetraetiletilendiammina (temed).

gel impilabile:

0.25ml di acrilammide impilabile, 0,75 ml di tampone di gel, 2 ml di ddh 2 o, 20% 10%aps, 2 piani.

ilimpilare e il gel separatore deve essere polimerizzato allo stesso tempo, equindi versare il gel impilabile sulla colla separatrice (versare con cura ma rapidamente).

caricamento del campione eelettroforesi:

peril minigel, 5-10 ul per pozzetto dà i migliori risultati. stratificare i campioni nel pozzetto con molta attenzione,ed essere sicuri di sciacquare qualsiasi acrilammide non polimerizzata prima di caricarla. dopocaricando il campione, è stata impostata una corrente costante di 25-35 mA nella configurazione del minigelper analisi elettroforetica. durante la corsa, la schiuma apparirà nella parte superiore diil catodo e il buffer addizionale del catodo devono essere aggiunti.


ilsopra descrizione della preparazione di gel tricine-sds-pagina fornisce unesempio per i ricercatori. ma in un esperimento specifico, è anche necessariotrovare un metodo di preparazione adatto adatto all'esperimento secondo ilsituazione attuale.


a cura di suzhou yacoo science co., ltd

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