L'enzima CELI è una nucleasi specifica che riconosce in modo specifico sia il singolo filamento che il doppio filamento. Attualmente, l'enzima CELI viene estratto principalmente dal sedano. Questo enzima può fendere in modo specifico basi non corrispondenti ed è ampiamente utilizzato nel campo del rilevamento delle mutazioni. Le teorie tradizionali ritengono che l'attività catalitica dell'enzima richieda solo Mg ²⁺ e Zn ²⁺ . Ditiotreitolo, nome inglese DL-Ditiotreitolo, abbreviato in DDT , la formula molecolare è C ₄ H ₁₀ O ₂ S ₂ , il peso molecolare è 154,25, spesso usato come agente riducente, ha un effetto antiossidante. Oggi introdurrò l'applicazione del DTT nella preparazione del tampone di digestione enzimatica della famiglia CELI.

Il tampone di digestione enzimatica della famiglia CELI è composto da tampone DTT, BSA (albumina di siero bovino), Triton X-100 0,02%, KCl 0,1M e tampone HEPES, tra cui:

Il tampone di digestione enzimatica della famiglia CELI contenente DTT è composto da tampone kit Mutation Detection Kit-S100 e DTT. Mutation Detection Kit-S100 kit buffer è un prodotto di Universal Gene Corporation, il numero di catalogo è 706025;

La concentrazione di DTT nel tampone di digestione enzimatica della famiglia CELI è 0,01-0,5 mM, 0,5-10 mM o 0,01-6 mM;

La concentrazione di BSA è 2ug/ml;

La concentrazione di tampone HEPES è 0,1 M e il PH è 7,5.

La nuova sostanza cataliticamente attiva DTT può migliorare ulteriormente l'attività di CELI, soprattutto per il rilevamento di mutazioni a bassa abbondanza. Rispetto al metodo di digestione enzimatica tradizionale, il metodo della presente invenzione è più sensibile e la concentrazione finale di DTT è compresa tra 0,01 e 10 mM. Entrambi possono migliorare la sensibilità di rilevamento dell'enzima CELI e dell'enzima CELII. Il rilevamento di mutanti sconosciuti a bassa abbondanza, come un determinato gene del cancro, ha un buon effetto di rilevamento. Soprattutto quando la piattaforma tecnologica TILLING rileva popolazioni mutagene, presenta evidenti vantaggi. Non solo semplifica le fasi di purificazione della PCR, ma migliora anche la risoluzione di rilevamento.

Riferimenti