negli esperimenti di biologia molecolare, induttore iptg per espressione proteica non è nuovo a tutti. è una mimica molecolare di allolattosi che innesca la trascrizione dell'operone lac e induce un'espressione proteica in cui il gene è sotto il controllo dell'operone lac.

ma nell'uso di iptg ( isopropil β-d-1-tiogalattopiranoside ), è sempre maggiore la concentrazione?

in primo luogo, esaminiamo il principio induttivo di iptg.

la stragrande maggioranza dei geni dei prokaryotes sono disposti in un cluster secondo relazioni funzionali e sono concentrate sui cromosomi per formare un'unità di trascrizione - l'operone. operone lattosio di e. Il coli contiene tre geni strutturali z, y e a, che codificano rispettivamente β-galattosidasi, permeasi e transacetilasi. inoltre, c'è il gene regolatore: sequenza di manipolazione (operatore), inizio sequenza p (promotore); mentre i (codificante repressore lac) non appartiene all'operone lattosio.

in questo sistema operon, l'induttore reale non è il lattosio. il lattosio entra in cellule ed è catalizzato da β-galattosidasi in induttore allolattosio-fisiologico. nell'esperimento, iptg ( isopropil glucosinolati galattosio glucoside ) sono ampiamente usati perché è un induttore forte che non è influenzato dal metabolismo batterico ed è molto stabile.

poi torniamo alla domanda precedente: la concentrazione di iptg, è più alta è migliore?

la risposta non è realmente!

(2) in generale, speriamo che la proteina solubile possa esprimere il più possibile, mentre un grande numero di inclusione si formerà se la concentrazione di iptg è troppo elevata, allora la quantità di proteina solubile è ridotta.

quindi, la concentrazione più appropriata di iptg non è spesso elevata.

il livello di espressione del gene target è influenzato da fattori quali la concentrazione dell'induttore, la temperatura di induzione, il tempo di induzione e così via. quindi, nell'espressione e nella purificazione di una proteina sconosciuta, è meglio studiare i fattori rilevanti, compresa la concentrazione dell'induttore iptg ( cas 367-93-1 ), al fine di selezionare le condizioni appropriate per ottenere i migliori risultati sperimentali.