ecl, dab e nbt / bcip metodi colorimetrici sono molto comunemente usati in esperimenti biochimici come immunoistochimica (ihc), immunocitochimica (icc) e western blot (wb).

sai qual è la differenza tra loro?

ecl: chemiluminescenza potenziata

ecl contiene generalmente luminol, h2o2, esaltatori luminosi e altre sostanze. il luminolo è ossidato da hrp e h2o2 per produrre fluorescenza, e questo processo è potenziato dall'esperdore luminescente.

l'enhancer luminescente svolge un ruolo chiave nel sistema, l'ottimizzatore luminescente ideale dovrebbe essere (1) sensibile alla luce, (2) stabilità luminosa e (3) sfondo basso o senza sfondo.

DAB - 3,3'-diaminobenzidina

dab è un substrato cromogenico per perossidasi, che perde elettroni in presenza di H2O2 ed esibisce cambiamenti di colore e accumulo per formare un prodotto insolubile all'abbronzatura. la reazione è la seguente:

HRP + h ₂ o ₂ + DAB → HRP + h ₂ o + tocco ossidato ↓

il metodo ha i vantaggi di una buona specificità, prestazioni stabili e funzionamento conveniente. è adatto per l'ibridazione e l'immunochimica delle proteine.

bcip-- 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato

nbt / bcip è una delle migliori combinazioni di substrato per la fosfatasi alcalina (ap). sotto la catalisi di ap, bcip viene idrolizzato per produrre un forte prodotto reattivo, che reagisce con nbt per formare sostanze chimiche insolubili dal blu scuro al blu violetto. il kit può essere utilizzato per la colorazione enzimatica di esperimenti di ihc e wb in sistemi di fosfatasi alcalina.

tabella 1. enzima corrispondente e reazione di ecl, nbt / bcip e dab