in tutti i tipi di esperimenti di cellule, proteine e DNA, una volta che i componenti lasciano l'ambiente biologico naturale, saranno seriamente colpiti. per fornire loro un buon ambiente naturale, deve essere usato tampone, tris, fosfato, hepes ( Acido 4-idrossietilpiperazinoetanosolfonico ), ecc ...... allora come scegliere un buffer più adatto?
diamo un'occhiata ai buffer biologici comunemente usati e alle loro caratteristiche:
1. Tampone fosfato
il tampone fosfato è il buffer più utilizzato. a causa della sua dissociazione secondaria, il buffer ha un ampio intervallo di ph e può essere configurato con tamponi acidi, basici e neutri di vari valori di ph:
2. buffer tris
il tampone tris è ampiamente utilizzato nella ricerca biochimica. è una base debole e viene solitamente utilizzata nella gamma "neutrale". buffer tris-hcl: ph = 7,5 ~ 8,5; buffer tris-fosfato: ph = da 5,0 a 9,0.
oltre a tris-hcl, tris ha una varietà di buffer di derivatizzazione:
3. tampone glicina
glicina tampone ha una vasta gamma ph e una vasta gamma di applicazioni. l'intervallo di ph è 2,0 ~ 11,0. il sistema più comune e il range ph sono mostrati nella seguente tabella:
tampone glicina |
gamma ph |
glicina -hcl |
2.0 ~ 5.0 |
glicina -naoh |
8.0 ~ 11.0 |
glicina tris |
8.0 ~ 11.0 |
glicinamide buffer |
7.8 ~ 8.8 |
glycylglycin e buffer |
8,0 ~ 9,0 |
4. buffer dell'herpes
l'hepes è un tampone anfotero non ionico con una buona capacità tampone nell'intervallo di pH 7,2 ~ 7,4. è comunemente usato in kit diagnostici biochimici, kit di estrazione DNA / DNA e kit diagnostici PCR.
tabella 1. vantaggi e svantaggi dei buffer comunemente usati
buffer |
vantaggi |
svantaggi |
fosfato |
facile da preparare in varie concentrazioni ampia gamma di ph il ph è meno influenzato dalla temperatura e concentrazione |
facile da formare precipitat ione con ioni comuni di calcio, magnesio e metalli pesanti inibire alcuni processi biochimici |
tris |
alcalino è forte; ha poca interferenza con i processi biochimici e non precipita con ioni di calcio, magnesio e ioni di metalli pesanti |
il ph è fortemente influenzato dalla concentrazione, diluita 10 volte, il ph change è maggiore di 0.1 grande effetto termico, come ph = 8,4 a 4 ° c e ph = 7,4 a 37 ° c facile da assorbire l'anidride carbonica nell'aria interferenza con alcuni elettrodi ph |
glicina |
fornisce un ambiente naturale più vicino per componenti cellulari e vari estratti |
simile al sistema tampone fosfato ; interferisce con alcuni processi di reazione biochimica, come i processi metabolici; |
HEPES |
mantiene un valore ph costante durante la coltura aperta o l'osservazione della cellula e non ha effetti tossici sulle cellule |
può essere tossico per alcune cellule ad alte concentrazioni e leggermente più costoso di altri tamponi. |
principi generali per la selezione dei buffer:
(1) la cosa più importante è determinare il valore ph richiesto dal sistema.
(2) selezionare il sistema tampone, la capacità tampone diminuirà significativamente quando il pka cambia più di un'unità ph;
(3) il sistema tampone non dovrebbe influenzare l'attività della proteina o la stabilità del DNA ed evitare interferenze da altri ioni;
(4) infine, dobbiamo considerare anche l'effetto della temperatura: la temperatura non solo influenza il buffer, ma influenza anche le cellule. la maggior parte delle cellule animali ha un pH compreso tra 7,0 e 7,5 a 37 ° C e quando la temperatura scende a 0 ° C, può raggiungere 8,0.
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