La tricina (CAS: 5704-04-1 ) è un eccellente tampone anfotero per i beni biologici. Lo scopo principale di Tricine è di inibire efficacemente batteri Gram-positivi, batteri Gram-negativi, lieviti e muffe, ed è anche uno stabilizzatore del pH per molti terreni di coltura per vaccini. L'applicazione della Tricina nel vaccino contro la rabbia è introdotta nel brevetto CN111840535B, in cui la Tricina è un componente del mezzo di coltura privo di siero, utilizzato principalmente come stabilizzatore del valore di pH. Questa settimana, l'editore di YACOO ha introdotto lo specifico processo di preparazione del vaccino contro la rabbia. Il processo specifico è il seguente:

1. Preparazione della soluzione madre

(1) Coltura cellulare: le cellule Vero sono state perfuse in terreno privo di siero nel bioreattore a 0,6~0,7 × 10 ⁷ cellule/ml, iniziare l'inoculazione del virus, in cui il terreno di coltura privo di siero cellulare Vero contiene 2 ~ 4 mmol/L di glutatione, 0,5 ～2,0 g/L di fruttosio e 0,5 ～2,0 g/L di tricina.

(2) Inoculazione del virus: inoculare il virus della rabbia rPV-2061 nelle cellule a 0,0025-0,01 MOI e coltivare per più di 6 ore. Iniziare a utilizzare una soluzione di mantenimento del virus priva di siero per la coltura di perfusione. La formula della soluzione di mantenimento priva di siero cellulare Vero contiene 2 ~ 4 mmol/L di glutatione, 0,5 ~ 2,0 g/ L di fruttosio, 0,5 ~ 2,0 g/L di tricina e 2 ~ 3 g/L di bicarbonato di sodio.

(3) Raccolta del virus: dopo l'inoculazione del virus, il virus verrà raccolto dai giorni 3-17 e si otterrà il liquido di raccolta del virus

（4）Inattivazione: utilizzare β - Lattone inattiva il virus.

(5) Digestione enzimatica: il DNA ospite delle cellule Vero viene digerito con nucleasi

(6) Purificazione: purificare il virus mediante cromatografia a setaccio molecolare. Dopo la purificazione, aggiungere il 3% (m/v) di albumina di siero umano e il 5% (m/v) di maltosio come stabilizzanti per preparare la soluzione originale

2. Preparazione del prodotto finito

（1 ） Aggiungere una quantità adeguata di agente protettivo liofilizzato come stabilizzante per ottenere prodotti semilavorati

（2 ） I prodotti semilavorati vengono trasformati in prodotti finiti dopo il subimballaggio e la liofilizzazione.

Il prodotto del vaccino contro la rabbia nel brevetto non ha additivi come siero bovino, tripsina di derivazione animale, gelatina e destrano e ha bassi residui di DNA e proteine ​​nelle cellule Vero e un'elevata sicurezza. Inoltre, la potenza dei prodotti vaccinali può ancora essere mantenuta al di sopra di 6,6 UI/dose dopo 28 giorni a 37 ℃ , con un'elevata stabilità termica. Inoltre, ogni serbatoio di bioreattore da 30 litri può produrre 160000 agenti, con un'elevata efficienza di produzione del processo.

Riferimento

CN111840535B La preparazione del vaccino contro la rabbia utilizzando cellule Vero prive di siero e virus della rabbia rPV-2061.